质粒提取(质粒提取试剂盒说明书)

1-碱裂解法提取质粒

DNA在pH5～9的溶液中是稳定的，但当pH＞12或pH＜3时，就会引起DNA双链之间氢键的解离而变性。溶液Ⅱ中NaOH浓度为0.2mob/L，加入溶液Ⅱ后，该系统的pH为10～16，因而促使染色体DNA与质粒的变性解离成单链。

碱裂解法通常有大量提取法和小量提取法，其提取原理是一样的，只需体积按一定比例扩大。纯化质粒DNA时通常还利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。开始进行克隆时，对于小量制备的质粒DNA，经过苯酚、氯仿抽提。

碱裂解法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下：接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2mlLB培养基。37℃振荡培养过夜。

质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA 分子。目前已有许多方法可用于质粒DNA 的提取，本实验采用碱裂解法提取质粒DNA。

溶液2中的主要成分是NaOH和SDS，是用来裂解细胞的。因为NaOH遇到二氧化碳容易反应生成碳酸氢钙，影响使用效果，因此要现配现用。SDS的话，低温容易产生沉淀。不过在37°C 水浴一下就好。主要还是NaOH的问题。

2-质粒提取的基本原理

1、质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。

2、在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。 从宿主细胞中提取质粒DNA，是DNA重组技术中最基础的实验技能。分离质粒DNA有三个步骤：培养细菌使质粒扩增，收集和裂解细菌，分离和纯化质粒DNA。

3、其基本原理为：当菌体在NaOH 和SDS 溶液中裂解时，蛋白质与DNA 发生变性，当加入中和液后， 质粒 DNA 分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA 不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。

3-质粒的提取原理

1、质粒提取是指去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。 目录 质粒提取原理 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA，是进行DNA重组的常用载体。

2、质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。

3、其基本原理为：当菌体在NaOH 和SDS 溶液中裂解时，蛋白质与DNA 发生变性，当加入中和液后， 质粒 DNA 分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA 不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。