质粒转染(质粒转染时间)

1-质粒转染会过滤吗

1、一般情况下，转染效率达到100%才不需要筛选。另，筛选是为了获得高产的细胞株，推荐还是进行一下比较好。义翘一般sinofection转染工程细胞之后，为了获得高产稳定细胞株，都会进行细胞筛选的。

2、没有质粒转染的细菌都被杀死，不能形成菌斑。那些转染了没有目的基因插入质粒的细菌，虽然能存活，但是由于酶的表达，形成的菌斑是蓝色的。只有那些白色的菌斑才是带有目的基因插入质粒的。一部就可以完成了。

3、其中主要包括利用离子交换层析、凝胶过滤层析、分级沉淀等分离质粒DNA和宿主DNA的方法。尽管这些方法大多数均被束之高阁，但其中最好的方法，也应是聚乙二醇分级沉淀法。

2-影响质粒转染效率的因素有哪些?

纯化质粒的质量也会影响转染效率，一定要选择高质量的质粒。

对以质粒为载体的重组分子而言，分子量大的转化效率低。⑶、操作方面 感受态细胞的制备对转化率影响较大。一般未经特殊处理的培养细胞对重组DNA分子不敏感，难以转化成功。

影响转化率的关键因素：①生长时期：实验发现在对数中期的大肠杆菌易生成感受态。转化时菌浓度应控制在不超过107／ml。

3-质粒与siRNA转染试剂的选择

1、质粒DNA和siRNA均可高效转染： RFect Prime核酸 转染试剂 RFect Prime系列核酸转染试剂盒是在RFect质粒DNA转染试剂盒的基础上进一步研发成功的可用于各类核酸高效转染的试剂盒。

2、A：我们的siRNA适用于各种转染方法。转染方法和转染试剂的选择，需要根据细胞来选择，对于容易转染的细胞，常用的转染方法是脂质体转染。

3、细胞系不同，它们所需的转染条件自然也不相同。举例来说，悬浮培养的鼠类原代细胞，就比贴壁培养的人类细胞更难转染。此外，神经元和巨噬细胞也令人颇为头疼，标准方法很难将siRNA转染进去。

4、应选择纯度高的质粒，首先DNA／RNA应该超纯(A260／A2801．8)，其次应不含内毒 素，同时质粒应溶于双蒸水而不是TE缓冲溶液。另外，DNA浓度不宜过高。

5、siRNA的合成需要注意的是一定要选用高纯度的siRNA，siRNA的纯度直接关系到转染效率和沉默效率。siRNA的工作浓度和siRNA的设计、细胞种类、目标基因有关。建议一定进行相关的预实验优化各条件。

6、.CFPEO细胞系转染试剂：CFPEO细胞系研究主要方向是哮喘、病毒感染、纤维化肺病和囊性纤维化等呼吸道问题。而CFPEO细胞系转染试剂一般适用于用于人气管上皮细胞的转染。

4-共转染的2个质粒有什么要求

1、转染两个质粒可以是相同荧光。根据查询相关公开信息显示：两个质粒同时转染至同一细胞中，它们都携带了绿色荧光蛋白基因，拥有相同的荧光，所以转染两个质粒可以是相同荧光。

2、应该可以，我做的是哺乳细胞，可以用2种质粒载体共转染，但同时转染时做稳定细胞株时筛选效率不高，可以考虑先转染一个，筛选稳定后再转另一个。

3、电转染实验时，应选择纯度高的质粒，首先DNA／RNA应该超纯(A260／A2801．8)，其次应不含内毒 素，同时质粒应溶于双蒸水而不是TE缓冲溶液。另外，DNA浓度不宜过高。更多关于电转染实验的内容，请咨询英格恩生物。

4、细胞状态及融合度：长势旺盛的细胞转染效果更佳，细胞密度应该在转染时融合度至少70%以上。DNA纯度及数量：确保质粒OD值A260/A280在8~0之间。DNA量不能太高，单独DNA也会对细胞生长有一个基础的影响。